無外泌體胎牛血清EXO-Free FBS Media

NANOLAB品牌無外泌體胎牛血清

(EXO-Free FBS Media)

貨號(hào)：360-23

規(guī)格：50ml/瓶

保存溫度：-20℃

品牌：NANOLAB

產(chǎn)品描述：當(dāng)外泌體在1980年*被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用，這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。exosome及其他細(xì)胞外囊泡正起著*的細(xì)胞通訊作用。在腫瘤發(fā)展過程中，exosome介導(dǎo)了關(guān)鍵的步驟，如刺激血管生成，削弱免疫反應(yīng)，甚至參與了轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成。在正常的生理過程中，exosome也起了重要作用，如胎盤exosome幫助形成對(duì)母親免疫系統(tǒng)的免疫抑制屏障?？傊谡：筒±淼臈l件下，細(xì)胞都釋放小囊泡，以各種方式影響其他細(xì)胞。

無外泌體血清可以特異性激發(fā)一些細(xì)胞反應(yīng)，表明它們可以在作為治療遞送載體方面有巨大的潛力。無外泌體血清的囊泡性質(zhì)使得它們適合作為用于藥物或核酸遞送的潛在納米載體。在這里，研究人員需要解決的問題是，無外泌體血清的大小分布也會(huì)影響外泌體的治療潛力。

1：利用聚合物沉淀分離的外泌體比超離法的粒子分布要小。

2：劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)聚合物沉淀所得的小粒徑的外泌體被細(xì)胞攝取后遷移更快。

產(chǎn)品應(yīng)用                         

360-23  EXO-Free FBS Media （無外泌體胎牛血清）操作手冊(cè)：

 對(duì)比

1):EXO-Free FBS Media大大降低了牛外泌體的含量

2):EXO-Free FBS Media去除了牛 CD63 外泌體

3):EXO-Free FBS Media 比超速離心FBS更*

4):EXO-Free FBS Media 具有無法檢測(cè)的牛microRNA水平

5):EXO-Free FBS Media與標(biāo)準(zhǔn)FBS的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線幾乎*

EXO-Free FBS Media大大降低了牛外泌體的含量

使用NANOLAB品牌Exo-FBS確保您的細(xì)胞或組織培養(yǎng)基中的外泌體制備僅包含來自細(xì)胞的外來體，而不是來自培養(yǎng)基中的FBS。 ELISA和NanoSight分析均證明，與標(biāo)準(zhǔn)FBS相比，Exo-FBS中牛外來體水平顯著降低。

NanoSight粒子分析在Exo-FBS中顯示超低外泌體殘留量

為了證明我們的Exo-FBS產(chǎn)品中外泌體的消耗，我們將標(biāo)準(zhǔn)FBS和Exo-FBS樣品1：1000稀釋，然后使用NanoSight LM10儀器分析粒徑和豐度。 標(biāo)準(zhǔn)FBS樣品顯示顯著量的外來體大小的微泡，其中Exo-FBS外泌體耗盡的FBS樣品具有外來體顆粒的急劇減少。

四跨膜蛋白CD63蛋白是外泌體的常見標(biāo)記物。 我們利用牛特異性抗CD63抗體開發(fā)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）。 在該ELISA測(cè)定中使用等體積（50μl）的標(biāo)準(zhǔn)FBS或Exo-FBS耗盡的培養(yǎng)基補(bǔ)充物。 與標(biāo)準(zhǔn)FBS相比，Exo-FBS中CD63陽性牛外來體的量顯著減少（繪制的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化為標(biāo)準(zhǔn)FBS的信號(hào)水平）。

NANOLAB品牌Exo-FBS比超速離心FBS更清潔

通過將NanoSight顆粒計(jì)數(shù)分析與源FBS，F(xiàn)BS超速離心18小時(shí)和外泌體耗盡的Exo-FBS產(chǎn)品進(jìn)行比較，在NANOLAB生產(chǎn)的每批Exo-FBS上生成質(zhì)量控制數(shù)據(jù)。 所有樣品以1：100稀釋，并一式三份收集NTA數(shù)據(jù)。

結(jié)論：

使用NANOLAB品牌不含外泌體胎牛血清，您可以確信您分離的外泌體是由培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的，而不是培養(yǎng)基中的污染物。

NANOLAB品牌不含外泌體胎牛血清具有無法檢測(cè)的牛microRNA水平

NANOLAB品牌不含外泌體胎牛血清不僅具有大大降低的外泌體水平，不含外泌體胎牛血清中的牛microRNA在高靈敏度qPCR測(cè)定中顯示不可檢測(cè)。 用Trizol提取方法處理標(biāo)準(zhǔn)FBS和Exo-FBS培養(yǎng)基補(bǔ)充物（4ml）以回收外來體RNA。 將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，并使用QuantiMir系統(tǒng)通過qPCR測(cè)量72個(gè)單獨(dú)的牛microRNA。 在測(cè)試的72種微RNA中，12種在FBS樣品中產(chǎn)生擴(kuò)增曲線，但在Exo-FBS樣品中沒有。

Exo-FBS與細(xì)胞生長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)FBS相同

Exo-FBS不僅能夠有效隔離標(biāo)準(zhǔn)FBS中存在的污染物的外泌體，它支持與標(biāo)準(zhǔn)FBS相同的生長(zhǎng)速率。

為了比較Exo-FBS與標(biāo)準(zhǔn)FBS中細(xì)胞的生長(zhǎng)速率，我們?cè)?0％標(biāo)準(zhǔn)FBS或添加10％的Exo-FBS的*培養(yǎng)基中培養(yǎng)HT1080纖維肉瘤細(xì)胞，PC-3前列腺癌細(xì)胞，MCF-7乳腺癌細(xì)胞和HEK293細(xì)胞。。 將細(xì)胞接種于10,000或20,000個(gè)細(xì)胞，然后在標(biāo)準(zhǔn)條件下在37℃，5％CO ₂下在所示培養(yǎng)基中培養(yǎng)5天。 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成像，計(jì)算生長(zhǎng)速率并觀察細(xì)胞形態(tài)。 對(duì)于在這4種細(xì)胞系中測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)FBS和Exo-FBS培養(yǎng)基，觀察到等同生長(zhǎng)和類似的細(xì)胞形態(tài)。